Выделение ДНК

Генная инженерия » Выделение ДНК

Рассмотрим методику выделения ДНК на примере ДНК плазмид. ДНК из плазмидосодержащих бактериальных клеток выделяют с помощью традиционной техники, заключающейся в получении клеточных экстрактов в присутствии детергентов и последующем удалении из экстрактов белков фенольной экстракцией Полная очистка плазмидной ДНК от белков, РНК и других соединений проводится в несколько стадий. После того как клетки разрушены, например, с помощью лизоцима (растворены их стенки), к экстракту добавляют детергент, чтобы растворить мембраны и инактивировать некоторые белки. Большинство хромосомной ДНК удаляют из получаемых препаратов обычным центрифугированием.

Часто для полной очистки используют хроматографию. Если требуется очень тщательная очистка, используют высокоскоростное центрифугирование в градиенте плотности CsCI с использованием этидия бромида. Оставшаяся хромосомная ДНК будет фрагментирована в линейную, тогда как плазмидная ДНК останется ковалентно закрытой. Поскольку этидий бромид менее плотен, чем ДНК, то при ультрацентрифугировании в центрифужной пробирке будет «выкручиваться» два кольца — плазмидная ДНК и хромосомная ДНК Плазмидную ДНК отбирают для дальнейшей работы, хромосомную ДНК выбрасывают.


Рекомендуем к прочтению:

Род петромицес – Petromyces
В отличие от перечисленных родов для грибов монотипного рода петромицес (Petromyces) характерны клейстотеций, образующиеся не на мицелии, а в твердых стромах, напоминающих склероции. Единственный вид этого рода — чесночный петромицес (P. ...

Динамические и статистические закономерности в природе
Основное содержание проблем детерминизма и причинности — это соотношение динамических и статистических закономерностей. Детерминизм — это учение об объективной закономерной взаимосвязи и взаимообусловленности явлений материального и духо ...

Независимая сегрегация и независимое комбинирование
Взгляд Менделя на наследственность у эукариот определялся двумя главными обнаруженными им явлениями. Первое-существование независимой сегрегации. Любой организм содержит пару генов для любого одиночного наследуемого признака, при этом каж ...